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论文关键词：抗原修复；丙三醇水溶液；免疫组化 在石蜡制片过程中，组织经福尔马林或其他固定液固定，常会引起蛋白质空间结构改变，产生蛋白内和蛋白间亚甲基交联，导致抗原决定簇被封闭，阻碍抗原与抗体结合，结果在石蜡切片中难以对抗原或抗体原位观察。1991年以来的热抗原修复法，能够破坏固定组织中蛋白内和蛋白问的亚甲基交联，打开被封闭的抗原决定簇[I]，恢复蛋白质空间结构，使抗原与抗体得以结合，在石蜡切片中能够显色，促进了免疫组化技术发展[2]。现在应用标记特异性抗体(或抗原)，利用抗原一抗体特异结合的原理，检测抗原或抗体在组织细胞原位的存在、分布和变化的免疫组化技术，在基础理论研究和临床诊断检测中广泛应用。作为免疫组化显色技术关键程序的热抗原修复法，有水浴热抗原修复法、微波热抗原修复法和高压热抗原修复法3种汁引。不同的热抗原修复法以及热抗原修复手段是否完善，必然强烈影响着万方数据丰平，等：热丙三醇水溶液抗原修复方法 43组织中抗原与抗体的结合效果。一般认为，石蜡切片组织在常压时温度为120℃，所处液体又不沸腾并维持一定时间的情况下进行热抗原修复则是理想的。上述3种热抗原修复法均不能达到要求，它们的免疫组化显色效果有待进一步提高。为此我们应用沸点较高的丙三醇水溶液作为热抗原修复液，对石蜡切片组织进行热抗原修复，用不同特异性抗体与石蜡切片组织的抗原结合使之湿色反应，取得良好免疫组化效果，创建了热丙三醇水溶液抗原修复法。现以原癌基因(c-myc)、B细胞淋巴瘤／白血病一2(B Cell Lymphoma／Leukemia-2)和丝氨酸蛋白酶((hni／HtrA2)3种特异性抗体免疫组化技术试验为例，用热丙j醇水溶液抗原修复程序与微波热抗原修复程序和高压热抗原修复程序进行对比，证实热丙三醇水溶液抗原修复法的优越性。 l 实验仪器设备及试剂 仪器设备：切片机、电热恒温箱、电热鼓风恒温箱、pH计、高』玉锅、微波炉等实验常用没备，以及病理组织技术常用器材。 主要试剂：原癌基因(c-myc)、B细胞淋巴瘤／白血病一2(B Cell Lymphorna／Leukemia一2)和丝氨酸蛋白酶(Omi／HtrA2)特异性抗体试剂盒(北京中杉金桥乍物技术有限公司)、丙毛醇(分析纯)、枸橼酸缓冲液(pH值为6．O)、枸橼酸缓冲液配制的50％丙t醇水溶液等。组织材料：本科室槲芪散药效动物实验模型组大鼠肝脏。 2 实验方法 (1)解剖取出大鼠肝脏组织，修成3 mm×3 mm×2 mm大小组织块。放人体积分数为lO％福尔马林液同定48 h后，自来水冲洗12 h；再经各级浓度乙醇上行、无水乙醇脱水后，经二甲苯透明，石蜡浸蜡及包埋；石蜡切片5“m，3一氨丙基一3一乙氧基甲硅烷液粘片，温箱50℃下烘干24 h。 (2)石蜡切片入二甲苯脱蜡，入无水乙醇置换二甲苯，再经各级浓度乙醇下行入水；入3％H。O：30rain，以消除内源性过氧化物酶活性；入磷酸盐缓冲液浸洗3次，每次2 rain；将切片分成3组，每组3张，用铅笔标记清楚；将一组切片移入已经预热到120℃的5 |
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